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審決分類 審判 全部申し立て 特36条4項詳細な説明の記載不備  G01N
審判 全部申し立て 2項進歩性  G01N
審判 全部申し立て 特36条6項1、2号及び3号 請求の範囲の記載不備  G01N
管理番号 1380930
総通号数 1 
発行国 JP 
公報種別 特許決定公報 
発行日 2022-01-28 
種別 異議の決定 
異議申立日 2020-08-04 
確定日 2021-10-29 
異議申立件数 1 
訂正明細書 true 
事件の表示 特許第６６４０２６７号発明「エンドトキシン測定剤」の特許異議申立事件について、次のとおり決定する。 
結論 特許第６６４０２６７号の特許請求の範囲を訂正請求書に添付された訂正特許請求の範囲のとおり、〔１−７〕について訂正することを認める。 特許第６６４０２６７号の請求項１ないし７に係る特許を維持する。 
理由 第１ 手続の経緯
特許第６６４０２６７号の請求項１〜７に係る特許についての出願は、２０１２年（平成２４年）２月２８日（パリ条約による優先権主張外国庁受理２０１１年２月２８日、米国）を国際出願日として出願した特願２０１３−５３８７４８号の一部を平成３０年４月９日に新たな特許出願としたものであって、令和２年１月７日にその特許権の設定登録がされ、同年２月５日に特許掲載公報が発行された。
本件特許異議の申立ての経緯は、次のとおりである。
令和２年 ８月 ４日 ：特許異議申立人中川賢治（以下「申立人」という。）による請求項１〜７に係る特許に対する特許異議の申立て
同年１０月 ９日付け：取消理由通知書
同年１２月１４日 ：特許権者による意見書及び訂正請求書の提出
令和３年 ２月 ５日 ：申立人による意見書の提出
同年 ３月２４日付け：取消理由通知書（決定の予告）
同年 ５月２８日 ：特許権者による意見書及び訂正請求書の提出
同年 ９月２８日 ：申立人による意見書の提出

第２ 訂正の適否
１ 訂正の内容
令和３年５月２８日に提出された訂正請求書（以下「本件訂正請求書」という。なお、令和２年１２月１４日に提出された訂正請求書は、特許法第120条の5第7項の規定により取り下げられたとみなす。）による請求の趣旨は、特許請求の範囲を本件訂正請求書に添付した訂正特許請求の範囲のとおりに訂正することを求めるものであり、その内容は、以下のとおりである。
（１）訂正事項１について
特許請求の範囲の請求項１において、「該タンパク質（１）〜（３）の各々は昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質である」とあるのを「該タンパク質（１）〜（３）の各々は昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり、前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される」に訂正する（下線は訂正箇所である。以下同様。また、訂正事項１で訂正される請求項１の記載を引用する請求項についても同様に訂正される。）。

（２）訂正事項２について
特許請求の範囲の請求項７において、「前記基質の反応に基づき、被験試料中のエンドトキシン量を算出する工程を含む」を「前記基質の反応に基づき、被験試料中のエンドトキシン量を算出する工程であって、エンドトキシン量と基質の反応の程度との間の相関データに基づき、前記被験試料に存在するエンドトキシンを定量する工程を含む」に訂正する。

（３）一群の請求項について
訂正前の請求項２〜７は請求項１を直接的又は間接的に引用するものであるから、請求項１〜７は一群の請求項である。一方、訂正事項１は、請求項１について訂正するもので、それに連動して請求項２〜７も訂正するものであり、訂正事項２は、請求項７について訂正するものであるから、訂正事項１及び２は、一群の請求項においてなされたものである。
よって、訂正事項１及び２は、特許法第120条の5第4項で規定する当該一群の請求項ごとに請求されているものである。

２ 訂正の目的の適否、新規事項の有無、特許請求の範囲の拡張・変更の存否
（１）訂正事項１について
ア 目的の適否
訂正事項１は、「昆虫細胞」を「前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される」ものに限定するものであるから、特許法第120条の5第2項ただし書第１号に掲げる特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。

イ 新規事項の有無
願書に添付した明細書、特許請求の範囲又は図面（以下「本件特許明細書等」という。）には、「【００４９】
昆虫細胞としては、各因子を発現できる限り特に制限されず、異種タンパク質の発現に通常用いられるものを好適に利用できる。そのような昆虫細胞としては、Sf9、Sf21、SF+、High-Fiveが挙げられる。昆虫細胞としては、Sf9が好ましい。」（下線は当審において付与した。以下同様。）と記載されていることから、訂正事項１は、本件特許明細書等に記載した事項の範囲内においてしたものである。

ウ 特許請求の範囲の拡張・変更の存否
訂正事項１は、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではない。

（２）訂正事項２について
ア 目的の適否
訂正事項２は、「被験試料中のエンドトキシン量を算出する工程」を「被験試料中のエンドトキシン量を算出する工程であって、エンドトキシン量と基質の反応の程度との間の相関データに基づき、前記被験試料に存在するエンドトキシンを定量する工程」に限定するものであるから、特許法第120条の5第2項ただし書第１号に掲げる特許請求の範囲の減縮を目的とするものである。

イ 新規事項の有無
本件特許明細書等には、「【００７９】
エンドトキシンの測定を定量的に行う場合には、濃度既知のエンドトキシン標準試料を用いてエンドトキシン量と検出用基質の反応の程度（発色や凝固等の程度）との間の相関データを取得し、当該相関データに基づき被験試料に存在するエンドトキシンを定量すればよい。相関データとは、例えば検量線である。定量はカイネティック法により行ってもよく、エンドポイント法によって行ってもよい。」と記載されていることから、訂正事項２は、本件特許明細書等に記載した事項の範囲内においてしたものである。

ウ 特許請求の範囲の拡張・変更の存否
訂正事項２は、実質上特許請求の範囲を拡張し、又は変更するものではない。

（３）小括
上記のとおり、訂正事項１及び２に係る訂正は、特許法第120条の5第2項ただし書第１号に掲げる事項を目的とするものであり、かつ、同条第９項で準用する同法第126条第5項及び第６項の規定に適合するものである。
よって、特許請求の範囲を、訂正請求書に添付された訂正特許請求の範囲のとおり、訂正後の請求項〔１−７〕について訂正することを認める。

第３ 本件発明
本件訂正請求により訂正された請求項１〜７に係る発明（以下、各請求項に係る発明を「本件発明１」等と記載し、まとめて記載する場合には「本件発明」と記載する。）は、訂正特許請求の範囲の請求項１〜７に記載されたとおりのものであり、そのうち、本件発明１を記載すると、以下のとおりである。
「【請求項１】
下記のタンパク質（１）〜（３）を含むエンドトキシン測定剤であって、該タンパク質（１）〜（３）の各々は昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり、
前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される、測定剤。
（１）下記のタンパク質（Ａ）または（Ｂ）であって、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ。
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質。
（２）カブトガニのファクターＢ。
（３）カブトガニのプロクロッティングエンザイム。」

第４ 取消理由（決定の予告）について
１ 取消理由の概要
令和３年３月２４日付け取消理由通知書（決定の予告）の取消理由の概要は、次のとおりである。
取消理由１（サポート要件）
本件特許は、その特許請求の範囲の下記の請求項に係る記載が、特許法第36条第6項第1号に規定にする要件を満たしていない特許出願に対してされたものである。
・請求項１、２、４〜７
迅速且つ高感度にエンドトキシンを測定できることが、当業者が理解できるように客観的な証拠となる実験データと共に記載されているのは、Ｓｆ９細胞をホストとして発現させた場合のみであるから、「前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞である」と特定されている請求項３以外の請求項に係る発明については、サポートされているものとはいえない。具体的には、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣとなるタンパク質として、「Sf9細胞」以外のHigh Five 細胞等の他の昆虫細胞をホストとして安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質を用いることがサポートされていることとはいえないことを指摘した。

２ 本件特許明細書等の記載について
（１）本件特許明細書等には、本件発明が、解決しようとする課題について、以下の記載がある（なお、下線は当審において付与した。以下同様。）。
「【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
本発明は、迅速且つ高感度にエンドトキシンを測定する方法を提供することを課題とする。本発明は、また、当該方法に用いるエンドトキシン測定剤およびその製造方法を提供することを課題とする。」

（２）また、「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」となる「組換えタンパク質」を「昆虫細胞をホストとして安定発現細胞株で発現することにより得」るときの「昆虫細胞」について
、以下の記載がある。
「【００４８】
（２）本発明のエンドトキシン測定剤の製造法
本発明のエンドトキシン測定剤に含まれる各因子は、昆虫細胞をホストとして用いて発現することで製造できる。
【００４９】
昆虫細胞としては、各因子を発現できる限り特に制限されず、異種タンパク質の発現に通常用いられるものを好適に利用できる。そのような昆虫細胞としては、Sf9、Sf21、SF+、High-Fiveが挙げられる。昆虫細胞としては、Sf9が好ましい。
【００５０】
昆虫細胞を培養する際の培養条件は、昆虫細胞が増殖できる限り特に制限されず、昆虫細胞の培養に通常用いられる条件を、必要により適宜修正して用いることができる。例えば、培地としては昆虫細胞の培養に通常用いられる培地を用いることができる。そのような培地としては、例えば市販の昆虫細胞用の無血清培地が挙げられる。具体的には、Ｓf９００ ＩＩ培地（インビトロジェン（Invitrogen）社）等を好適に用いることができる。培養は、例えば、２７℃〜２８℃で、振とう培養により行うことができる。
【００５１】
昆虫細胞をホストとして用いて各因子を発現する手法は、各因子を発現できる限り特に制限されず、異種タンパク質の発現に通常用いられる手法を好適に利用できる。例えば、各因子をコードする遺伝子を組み込んだウイルスを昆虫細胞に感染させることで各因子を発現させることができる（ウイルス法）。また、各因子をコードする遺伝子を組み込んだベクターを昆虫細胞に導入し、ホストの染色体上に当該遺伝子を組み込むことで各因子を発現させることができる（安定発現細胞株法）。」

（３）そして、実施例において、安定発現細胞株で発現するためのホストとなる昆虫細胞について、以下の記載がある。
「【００９３】
（１−２）プラスミドを利用した方法（以下、「安定発現細胞株法」ともいう）
本実施例では、ファクターＣ、ファクターＢ、プロクロッティングエンザイムのそれぞれをコードする遺伝子を昆虫細胞の染色体に組み込んで安定発現細胞株を構築し、各因子を発現させてエンドトキシン測定剤を製造した。
【００９４】
（１−２−１）安定発現細胞株の作製および培養
上述のウイルス法で用いたＨｉｓタグなしファクターＣ遺伝子、ファクターＢ遺伝子（配列番号８）、およびプロクロッティングエンザイム遺伝子（配列番号９）の各々を、ｐＩＺベクターキット（インビトロジェン（Invitrogen）社）を用いてＳｆ９細胞（インビトロジェン（Invitrogen）社）に導入した。
【００９５】
具体的には、まず、同キットにおけるベクターｐＩＺ／Ｖ５−Ｈｉｓ中のＥｃｏＲＶとＭｌｕＩ認識部位の間に前記ＤＮＡを各々組み込み、各々同キットにおけるセルフェクチンと混合後、各々Ｓｆ９細胞に導入した。ｐＩＺ／Ｖ５−Ｈｉｓへの前記ＤＮＡの組み込み位置等を図２に示す。図２中の最上部にある太い矢印部分に、前記ＤＮＡのいずれかが組み込まれる。Ｓｆ９細胞用の培地として、抗生物質（抗生物質−抗真菌剤（ｘ１００）；インビトロジェンInvitrogen）社）（終濃度ｘ１）、Ｚｅｏｃｉｎ抗生物質（インビトロジェン（invitrogen）社）（終濃度５０μｇ／ｍＬ）を含有するＳf９００ ＩＩＩ培地（Invitrogen）を用いた。これにより得られた各ＤＮＡが導入された細胞株を、６×１０5細胞／ｍＬ（１Ｌ）となるように前記培地で調製し、２８℃で９６時間、振とう培養した。
【００９６】
なお、ｐＩＺ／Ｖ５−ＨｉｓにはＨｉｓタグ配列が含まれているが、前記ＤＮＡはいずれもストップコドンを有しているため、ファクターＣ、ファクターＢ、及びプロクロッティングエンザイムは、いずれも、Ｈｉｓタグが付加されない形で発現される。」と記載され、
それを用いた結果として、
「【０１０１】
（２−２）ファクターＣの活性比較
前記各ファクターＣ溶液につき、ファクターＣの量を揃えて、プロクロッティングエンザイムの活性化能を調べた。
【０１０２】
具体的には、まず、ウイルス法により得られたＨｉｓタグ付ファクターＣ溶液（０．７μＬ又は５μＬ）、ウイルス法により得られたファクターＣ（Ｈｉｓタグなし）溶液（５μＬ）、安定発現細胞株法により得られたファクターＣ（Ｈｉｓタグなし）溶液（１．７μＬ）を、各々９６穴プレートのウェルに入れた。次に、各ウェルの全量が１００μＬとなるように、実施例１のウイルス法の（１−１−４）における０．１μｍのフィルター通過後に得られたファクターＢ含有溶液（５μＬ）、プロクロッティングエンザイム含有溶液（５μＬ）、およびＢｏｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ（終濃度０．３ｍＭ）、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ８．０）（終濃度１００ｍＭ）、エンドトキシン（製品名 ＵＳＰ−Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ、生化学バイオビジネス（株）販売）（検体濃度０、０．０５又は０．５ＥＵ／ｍＬ）５０μＬをウェルに添加し、混合した後、３７℃で３時間インキュベートして、経時的に４０５ｎｍの吸光度を測定した。陰性対照として蒸留水を用いた。かかる吸光度の増加の速度（吸光度変化率）は、プロクロッティングエンザイムの活性化能を反映する。なお、「ＥＵ」とは「エンドトキシンユニット」であり、エンドトキシン量を示す単位である（以下、同じ）。
【０１０３】
結果を図４に示す。図４中、「ＤＷ」は蒸留水を、「Ｖｉｒｕｓ ＋ Ｈｉｓ ｔａｇ（ｘ１）」はウイルス法により得られたＨｉｓタグ付ファクターＣ溶液（０．７μＬ）を、「Ｖｉｒｕｓ ＋ Ｈｉｓ ｔａｇ（ｘ７）」は同溶液（５μＬ）を、「Ｖｉｒｕｓ Ｎｏ ｔａｇ（ｘ１）」はウイルス法により得られたファクターＣ（Ｈｉｓタグなし）溶液を、「Ｓｔａｂｌｅ Ｓｆ９ Ｎｏ ｔａｇ（ｘ１）」は安定発現細胞株法により得られたファクターＣ（Ｈｉｓタグなし）溶液をそれぞれ示す。
【０１０４】
その結果、Ｈｉｓタグ付ファクターＣ溶液は、ファクターＣの量を揃えたもの（０．７μＬ）のみならず、その量を約７倍にしたもの（５μＬ）についても、プロクロッティングエンザイムの活性化は見られないか、極わずかであった。一方、Ｈｉｓタグが付加されていないファクターＣは、ウイルス法により得たもの、安定発現細胞株法により得たものを問わず、顕著なプロクロッティングエンザイムの活性化能を示した。
【０１０５】
以上の結果から、Ｈｉｓタグ配列を付加しない形で発現させた組換えファクターＣ分子は、Ｈｉｓタグ配列を付加した形で発現させた組換えファクターＣ分子よりも、はるかに強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有することが示された。また、発現させた各タンパク質を、精製することなく、培養上清に含有されている状態のままで使用できることが示された。」と記載され、図４として以下の図面が記載されている。
【図４】

加えて、本件特許明細書等では、Ｓｆ９細胞の昆虫細胞をホストとして安定発現細胞株で発現することにより得られるＣ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣと、Ｓｆ９細胞の昆虫細胞をホストとしてウイルス法で発現することにより得られるＣ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣとを比較した結果として、以下の記載もある。
「【０１０７】
結果を図５に示す。その結果、ウイルス法で発現されたファクターＣは、培養時間とともに分解することが示された。また、プロテアーゼ阻害剤を添加したものについても、ある程度分解していることが示された。」
「【０１０９】
結果を図６に示す。その結果、安定発現細胞株法で発現されたファクターＣは、プロテアーゼ阻害剤の非存在下で１６８時間経過しても分解されなかった。このことから、安定発現細胞株法を採用すると、ファクターＣの分解を阻止できることが示された。」
「【０１１２】
一方、安定発現細胞株法によれば、このような中空糸ろ過膜によるろ過の工程を経なくても、エンドトキシンが０ＥＵ／ｍＬにおけるプロクロッティングエンザイムの活性化（エンドトキシン測定時のブランク値）が低く抑えられていた（図４）。
【０１１３】
これらの結果から、ウイルス法を用いる場合には中空糸ろ過膜によるろ過が必須である反面、安定発現細胞株法によれば、かかるろ過が不要であることが示された。
【０１１５】
結果を図８に示す。その結果、ウイルス法で発現させた各因子を用いた場合、０．００１〜０．１０ＥＵ／ｍＬの範囲内で、エンドトキシン濃度の増加に応じて吸光度変化率が直線的に増加することが示された。
【０１１７】
結果を図９に示す。その結果、安定発現細胞法で発現させた各因子を用いた場合、０．０００５〜０．１ＥＵ／ｍＬの範囲内で、エンドトキシン濃度の増加に応じて吸光度変化率が直線的に増加することが示された。」

３ 実験成績証明書
特許権者は、令和３年５月２８日に提出された意見書に乙第５号証（以下「乙５」という。）として、以下の実験成績証明書を添付している。





４ 当審の判断
（１）上記２（３）に摘記したように、本件特許明細書等の実施例には、「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」である「組換えタンパク質」を「昆虫細胞をホストとして安定発現細胞株で発現することにより得」るときの「昆虫細胞」について「Ｓｆ９細胞」の記載があり、上記図４及び【０１０５】には、その「Ｓｆ９細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」である「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」が、Ｈｉｓタグ配列を付加した形で発現させた組換えファクターＣ分子よりも、はるかに強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有することが示されている。
一方、上記２（２）に摘記した【００４９】には、「昆虫細胞としては、各因子を発現できる限り特に制限されず、異種タンパク質の発現に通常用いられるものを好適に利用できる。そのような昆虫細胞としては、Sf9、Sf21、SF+、High-Fiveが挙げられる。」との記載もある。
そこで、昆虫細胞としてＳｆ９細胞以外のＳｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」である「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」が、Ｓｆ９細胞をホストとしたときと同様に、強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有するかどうかについて検討する。

（２）乙５について
乙５の図Ｂにおける「TFC」とは、乙５の「５．実験内容及び結果」を参照すると、「Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」である「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」のことである。そうすると、乙５の図Ｂには、「Ｓｆ９細胞」と同様に、「Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」である「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」が、Ｈｉｓタグ配列を付加した形で発現させた組換えファクターＣ分子よりも、はるかに強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有することが示されているといえる。

（３）Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞について
Ｓｆ２１細胞とＳＦ＋細胞は、Ｓｆ９細胞と同じスポドプテラ・フルギペルダの卵巣を由来とするものであるから、スポドプテラ・フルギペルダの卵巣を由来としない「Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」と比べて、「Ｓｆ２１細胞」又は「ＳＦ＋細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」は、「Ｓｆ９細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」に、その性質がより近いものとなる。
そうすると、上記（２）で述べたとおり、「Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」である「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」が、強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有することが示されている以上、より性質の近い「Ｓｆ２１細胞」又は「ＳＦ＋細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」である「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」についても、強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有するといえる。

（４）課題の解決について
上記（２）及び（３）を踏まえると、昆虫細胞として、実施例に記載されている「Ｓｆ９細胞」以外にも、上記２（２）に摘記した【００４９】に「昆虫細胞としては、各因子を発現できる限り特に制限されず、異種タンパク質の発現に通常用いられるものを好適に利用できる。そのような昆虫細胞としては、Sf9、Sf21、SF+、High-Fiveが挙げられる。」と記載されている「Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞」についても、強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有し、上記２（１）で記載されている「迅速且つ高感度にエンドトキシンを測定する」という課題が解決できることを当業者が認識できるものであるといえる。
そうすると、本件発明１の「Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される」「昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり」「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」は、強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有することから、上記２（１）で記載されている「迅速且つ高感度にエンドトキシンを測定する」という課題が解決できることを当業者が認識できるように記載された範囲を超えるものではない。
よって、本件発明１の「Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される」「昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり」「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」は、発明の詳細な説明に記載したものである。

（５）小括
よって、本件発明１及びそれを引用する本件発明２〜７は、発明の詳細な説明に記載したものであるから、特許法第36条第6項第1号に規定にする要件を満たしていないとはいえない。

５ 申立人の主張について
申立人が令和３年９月２８日に提出した意見書について検討する。
（１）甲第１１号証、甲第１２号証について
ア 申立人は、以下の甲第１１号証、甲第１２号証（以下「甲１１」、「甲１２」という。）を提示している。
甲１１：Geislerand Jarvis, "Insect Cell Glycosylation Patterns in the Context of Biopharmaceuticals",'Post-translational Modification of Protein Biopharmaceuticals', Wiley-VCH 2009, p.165-191
甲１２：lkonomouet al., "Supernatant proteolytic activities of High-Five insect cells grown in serum-free culture", Biotechnology Letters, 2002, vol.24, p. 965-969

（ア）甲１１の記載について
「Recombinant interferon-γ secreted from baculovirus-infected Sf9 cells was found to have only paucimannose N-glycans, in contrast to the complex, sialylated N-glycans found on native interferon-γ secreted by CHO cells [27, 28]. Likewise, recombinant human transferrin produced by baculovirus-infected T.ni cells had mostly paucimannose N-glycans, but also a minority of N-acetylglucosamine terminated hybrid N-glycans [29].」（１６９頁下欄１〜６行）
（申立人訳参照：バキュロウイルスに感染したSf9細胞から分泌された組換えインターフェロン-γは、CHO 細胞によって分泌された天然のインターフェロン-γに見られる複雑なシアル化N-グリカンとは対照的に、パウシマンノースN-グリカンのみを持っていることがわかった[27、28]。同様に、バキュロウイルスに感染したT.ni細胞によって産生された組換えヒトトランスフェリンは、ほとんどがパウシマンノースN-グリカンを持っていたが、少数のN-アセチルグルコサミン末端ハイブリッドN-グリカンも持っていた[29]。）」

「With respect to the two lepidopteran insect cell lines used most commonly in the BEVS, Sf9 cells produce a relatively small fraction while High Five cells produce a much larger fraction of N-glycans with αl,3-linked fucose.」（１７２頁１８〜２０行）
(申立人訳参照：BEVSで最も一般的に使用される2つの鱗翅目昆虫細胞株に関して、Sf9細胞は比較的小さな画分を生成するが、High Five 細胞はα1,3-結合フコースを持つN-グリカンのはるかに大きな画分を生成する。）

（イ）甲１２の記載について
「Metalloprotease activity is rather uncommon for cultured insect cells and few reports exist on proteolytic activity of non-infected cells. A 49 kDa cysteine protease was expressed intracellularly in Sf-9 cells both before and after infection (Naggie & Bentley 1998). In two recent analytical studies, it was demonstrated that Sf-9 cells express mainly aspartic and cysteine proteases both before and after infection (Gotoh et al. 2001a, b), although the latter can also be baculovirus-encoded proteases (Slack et al. 1995). In another report, serine protease activity was found in baculovirus・infected Sf-21 cells (Grosch & Hasilik 1998). Our study suggests that proteolytic activity of High-Five cells is somewhat different, at least for the extracellular proteases. The expressed proteases were active on case in and no activity was detected on substrates such as gelatin and BSA, which have been previously employed to reveal protease activity of Sf-9 cells (Naggie et al. 1997, Naggie & Bentley 1998).」（９６８頁右欄２０〜３９行）
（申立人訳参照：メタロプロテアーゼ活性は培養昆虫細胞ではかなりまれであり、非感染細胞のタンパク質分解活性に関する報告はほとんどない。49kDaのシステインプロテアーゼは、感染の前後の両方でSf-9細胞の細胞内に発現していた(Naggie&Bentley 1998)。最近の2つの分析研究では、Sf-9細胞は、感染前後の両方で主にアスパラギン酸プロテアーゼとシステインプロテアーゼを発現することが示されたが(Gotoh他、2001a、b) 、後者はバキュロウイルスにコードされたプロテアーゼでもある(Slack他、1995)。別の報告では、セリンプロテアーゼ活性がバキュロウイルスに感染したSf-21細胞で発見された(Grosch&Hasilik、1998)。私たちの研究は、少なくとも細胞外プロテアーゼについては、High-Five細胞のタンパク質分解活性がいくらか異なることを示唆している。発現されたプロテアーゼはカゼインに対して活性であり、Sf-9細胞のプロテアーゼ活性を明らかにするために以前に使用されたゼラチンやBSAなどの基質では活性は検出されなかった(Naggie他、1997、Naggie&Bentley、1998)。）」

そして、上記甲１１及び１２の記載より、「これらの知見から、元々の生物の属種が異なるＳｆ９細胞(Spodopterafrugiperda由来）とＨｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞(Trichoplusia ni由来）を、昆虫細胞という区分で宿主細胞として同一視するのには多大な無理がある。甲第９〜１１号証に記載されているように、宿主細胞の違いにより組換えタンパク質の性質や生産性に差異が生じることを考慮するならば、組換えファクターＣ等の生産をＳｆ９細胞のみでしか実施していない本件明細書の記載から、生物種としての由来がＳｆ９細胞とは異なるＨｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞にまで本件発明の技術的範囲を拡大主張するのは不適切である。」と主張している。

イ 当審のアに対する判断
まず、甲１１及び１２とも、本件特許明細書等でいう「ウイルス法」に関するものであり、本件発明１で特定される「安定発現細胞株で発現する」（本件特許明細書等でいう「安定発現細胞株法」）ものではない。
そして、上記４の「当審の判断」においては、Ｓｆ９細胞とＨｉｇｈ ｆｉｖｅ細胞を「同一視」しておらず、乙５を参照して、「Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞」「をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質」である「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ」が、Ｈｉｓタグ配列を付加した形で発現させた組換えファクターＣ分子よりも、はるかに強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有することから、「Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞」の場合にも、Ｓｆ９と同様に、「迅速且つ高感度にエンドトキシンを測定する」という課題が解決できることを当業者が認識できるものであると判断したものである。また、上記甲１１及び１２の記載によって、乙５の実験結果の信頼性がそがれることはなく、上記当審の判断が誤りであるということはできない。

（２）活性の強度について
ア 申立人は、「本件の場合、「共通の機能及び類似の性能」とは、「迅速かつ高感度にエンドトキシンを測定できる」ことであり、単に「エンドトキシンを測定できる」ことではない。・・・争点は、「Ｓｆ２１細胞、Ｓｆ＋細胞及びＨｉｇｈ ｆｉｖｅ細胞の安定細胞株で生産されたファクターＣの活性の強度が、Ｓｆ９細胞の安定細胞株で生産されたファクターＣの活性の強度と同程度であるかどうか」であって、「Ｓｆ２１細胞、Ｓｆ＋細胞及びＨｉｇｈ ｆｉｖｅ細胞の安定細胞株で生産されたファクターＣが、Ｓｆ９細胞の安定細胞株で生産されたファクターＣと同じ活性を有しているか、すなわち、Ｓｆ２１細胞、Ｓｆ＋細胞及びＨｉｇｈ ｆｉｖｅ細胞の安定細胞株で生産されたファクターＣを用いることでエンドトキシンを測定できるかどうか」ではない。」と主張している。

イ 当審のアに対する判断
乙５において、Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であるＣ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣの活性の強度を示した図Ｂを参照すると、0.05EU/mLでの活性の値は７mAbs/min、0.5EU/mLでの活性の値は１２mAbs/min程度であるのに対し、本件特許明細書等の上記図４を参照すると、Stable Sf9 No tagの0.05EU/mLでの活性の値は９mAbs/min、0.5EU/mLでの活性の値は１７mAbs/min程度である。
また、申立人も意見書で「乙第５号証に記載されているＨｉｇｈ ｆｉｖｅ細胞で発現させたファクターＣ組換えタンパク質を使用したエンドトキシン測定の結果と、本件明細書に記載されているＳｆ９細胞で発現させたファクターＣ組換えタンパク質を使用したエンドトキシン測定の結果を比較した。比較結果を下記表及びグラフに示す。」として、以下のグラフを示し、「HighFive-FacCの方がSf9-FacCよりも検量線の傾きが大きく活性が高いことが示されている。」と述べている。
そうすると、Ｈｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であるＣ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣを用いることで、単にエンドトキシンを測定するだけでなく、「迅速且つ高感度にエンドトキシンを測定する」という課題が解決するために十分な活性強度を有しているといえる。


（４）出願後の実験データ
ア 申立人は、「サポート要件は、本願出願時の明細書に基づいて判断されるものであり、本願出願後になされた実験データは、サポート要件を充足するか否かの判断資料としては不適当である。」と主張している。

イ 当審のアに対する判断
日本国特許庁の「特許・実用新案 審査基準」の第II部第２章第２節「サポート要件(特許法第36条第6項第1号)」の「3.2 出願人の反論、釈明等」の項目を参照すると、
「・・・出願時の技術常識等を示しつつ、そのような技術常識に照らせば、請求項に係る発明の範囲まで、発明の詳細な説明に開示された内容を拡張ないし一般化できることを、意見書において主張することができる。また、実験成績証明書によりこのような意見書の主張を裏付けることができる。」と記載されている。
特許権者は、令和２年１２月１４日に提出した意見書において、乙第１号証〜乙第４号証を提示し、乙第１号証〜乙第４号証の記載及び申立人が提出した甲第９号証の記載に基づいて、Sf9細胞を宿主として組換え生産したタンパク質と、High-Five細胞等の昆虫細胞を宿主として組換え生産したタンパク質とでは、共通の機能及び類似の性能を有することから、Sf細胞以外のHigh-Five細胞等の昆虫細胞を宿主として組替え生産した「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」ファクターＣも顕著なプロクロッティングエンザイム活性化能を有することが「予想」されると主張するにとどまり、それを裏付けるものを示していなかった。そこで、令和３年５月２８日に提出された意見書において、それを裏付けるために乙第５号証として実験成績証明書を示してきたものと理解することが相当である。
そうすると、ここで提出されてきた実験成績証明書は、乙第１号証〜乙第４号証及び甲第９号証によって出願時の技術常識等を示しつつ、そのような技術常識に照らせば、Sf9細胞を宿主として組換え生産したタンパク質からHigh-Five 細胞の昆虫細胞を宿主として組換え生産したタンパク質まで拡張ないし一般化できるとの意見書での主張を裏付けるために提出されたものといえることから、上記審査基準を参照すると、申立人が主張する「本願出願後になされた実験データは、サポート要件を充足するか否かの判断資料としては不適当である」とまではいえない。

６ まとめ
したがって、本件発明１及びそれを引用する本件発明２〜７に係る特許は、その特許請求の範囲の記載が、特許法第36条第6項第1号に規定にする要件を満たしていない特許出願に対してされたものとはいえないことから、取消理由通知書（決定の予告）の取消理由によって、本件発明１並びにそれを引用する本件発明２及び４〜７に係る特許取り消すことはできない。

第５ 取消理由通知において採用しなかった特許異議申立理由について
１ 申立理由（進歩性）
（１）申立人は、特許異議申立書で、本件発明１〜７は、甲第１号証に記載された発明に、甲第２-１号証、甲第２-２号証、及び甲第３号証、必要であればさらに、甲第４号証〜甲第７号証を組み合わせることによって当業者が容易に発明をすることができたものであるから、請求項１〜７に係る特許は、特許法第29条第2項の規定に違反してされたものであり、特許法第113条第2号に該当し、取り消されるべきものであると主張している。

甲第１号証：国際公開第２００８／００４６７４号
甲第２−１号証：特表２００５−５００５２０号公報
甲第２−２号証：pFastBaclのベクターマップ:ThermoFisher Scientific社のホームページにおける「Bac-to-BacTM Baculovirus Expression System」（製品番号:10359016)の説明、［on line ］、［令和２年７月１３日検索］、インターネット＜URLhttps://tools, thermofisher. com/content/sfs/vectors/pfastbacl_map. pdf>
甲第３号証：Wang et al.,“Functional expression of full length Limulus Factor C in stably transformed Sf9 cells.”，Biotechnology Letters, 2001, vol.23，p.71-76
甲第４号証：Hom and Volkman,“Preventing Proteolytic Artifacts in the Baculo-virus Expression System”，BioTechniques, 1998, vol.25, p.18-20、
甲第５号証：Ikonomou et al.,“Insect cell culture for industrial production of recombinant proteins”，Appl Microbiol Biotechnol (Applied Microbiology and Biotechnology), 2003, vol.62, p.1-20、
甲第６号証：Douris et al.,“STABLY TRANSFORMED INSECT CELL LINES. TOOLS FOR EXPRESSION OF SECRETED AND MEMBRANE-ANCHORED PROTEINS AND HIGH-THROUGHPUT SCREENING PLATFORMS FOR DRUG AND INSECTICIDE DISCOVERY”，ADVANCES IN VIRUS RESEARCH. 2006, vol.68, p.113-156、
甲第７号証：山地秀樹、「M216培養昆虫細胞を用いた有用物質生産」、SCEJ 42nd Autumn Meeting, 2010, 一般社団法人化学工学会 p.673、
（上記甲第１号証〜甲第７号証は、以下「甲１」〜「甲７」という。）

（２）甲号証の記載について
ア 甲１について
（ア）記載事項
（甲１ア）「技術分野
[0001]本発明は、カブトガニ由来のプロクロッティングエンザイムをコードする核酸、これを保持するウイルス、これを保持する細胞及びこれを用いたプロクロッティングエンザイムの生産方法、さらにはこれにより得られたプロクロッティングエンザイムを用いるＥｔやＢＧの検出方法及び検出キットに関する。・・・
[0008]上記の背景技術の欄を含め、本出願書類の全てにおいて使用する略号は以下の通りである。
Ｐｒｏ−ＣＥ：プロクロッティングエンザイム（pro-clotting enzyme）
ＣＥ：クロッティングエンザイム（clotting enzyme）・・・
Ｅｔ：エンドトキシン（「リポポリサッカライド」ともいう。）」

（甲１イ）「[0020]また本発明は、本発明生産方法により製造されるＰｒｏ−ＣＥ（以下、「本発明酵素」という。）を提供する。
[0021]また本発明は、Ｅｔを検出するための被験試料において、本発明酵素及び「Ｅｔと接触することによりＰｒｏ−ＣＥをＣＥに変換させる活性を発現するセリンプロテアーゼ前駆体」を共存させ、本発明酵素からＣＥへの変換に伴う酵素活性を指標として、当該試料中のＥｔの検出を行うことを特徴とする、Ｅｔの検出方法（以下、「本発明方法１」という。）を提供する。・・・
[0024]
・・・。このように、本発明方法１を行うためのカスケード反応タンパク質の全てを組換え型とすることは、特に、貴重な生物資源を保護する観点から意義深く、生物保護、動物代替への貢献は計り知れない。
[0025]Ｅｔの検出系の構成要素として用いられるＣ因子又はＢ因子を組換え型因子とする場合、これらの因子をコードする遺伝子を組み込むベクターと、これを形質導入する宿主の選択は、特に限定されずに行うことも可能であるが、前述の組換え型のＰｒｏ−ＣＥと同様に、ベクターとして、ウイルス、好適には、バキュロウイルスが挙げられ、バキュロウイルスのなかでも、ＮＰＶが好ましく、ＡｃＮＰＶであることがより好ましい。そして、宿主としては、大腸菌由来、バクテリア由来、酵母由来、昆虫由来である細胞等が例示されるが、好適な本発明ウイルスがバキュロウイルスであり、当該ウイルスを選択する場合には、昆虫由来の細胞を選択することが好適である。」

（甲１ウ）「[0079]＜３＞本発明細胞
本発明細胞は、本発明ウイルスを保持する細胞である。
[0080]「本発明ウイルス」についての説明は、前記の通りである。
[0081]ここで用いる「細胞」は、本発明ウイルスが感染しうる細胞であって、かつ、本発明ウイルスが保持しているカブトガニ由来のＰｒｏ−ＣＥが発現することができるものであれば良い。その一例として昆虫に由来する細胞を挙げることができる。また昆虫に由来する細胞として、Ｓｆ９細胞を例示することができる。
[0082]本発明ウイルスを細胞に保持させる方法も特に限定されないが、例えばウイルスとしてＮＰＶを採用した場合には、単に本発明ウイルスと細胞とを接触させるだけで、本発明ウイルスを当該細胞に感染させることができ、本発明ウイルスを当該細胞に保持させることができる。その具体的な方法の一例は、後述の実施例を参照されたい。
[0083]本発明細胞は、カブトガニ由来のＰｒｏ−ＣＥを生産する能力を有することから、これらの性質を指標にして、本発明細胞を選択することができる。
[0084]本発明細胞は、例えば後述する本発明生産方法等に利用することができる。
[0085]＜４＞本発明生産方法
本発明生産方法は、本発明細胞を生育させ、その生育物からカブトガニ由来のＰｒｏ−ＣＥを採取する工程を少なくとも含む、カブトガニ由来のＰｒｏ−ＣＥの生産方法である。」

（甲１エ）「[0099]＜６＞本発明方法１
本発明方法１は、Ｅｔを検出するための被験試料において、本発明酵素及び「Ｅｔと接触することによりＰｒｏ−ＣＥをＣＥに変換させる活性を発現するセリンプロテアーゼ前駆体」を共存させ、本発明酵素からＣＥへの変換に伴う酵素活性を指標として、当該試料中のＥｔの検出を行うことを特徴とする、Ｅｔの鋭敏な検出方法である。・・・
[0105]本発明方法１で用いられる「Ｃ因子」及び「Ｂ因子」はその機能を保持している限りにおいて特に限定されない。例えば、４種のカブトガニ、タキプレウス・トリデンタツス、リムルス・ポリフェムス、タキプレウス・ギガス及びタキプレウス・ロツンディカウダのいずれかに由来するライセートをクロマトグラフィー等で精製することにより得た天然のＣ因子画分、Ｂ因子画分を用いることもでき、組換えＣ因子、Ｂ因子を用いることもできる。天然のＣ因子、Ｂ因子はデキストラン硫酸、スルホプロピル基等を結合した担体又は特異的な吸着担体等を用いてライセートを処理し、Ｃ因子、Ｂ因子の画分を得ることができる。また、組換え体に関しては、例えばタキプレウス・トリデンタツス及びタキプレウス・ロツンディカウダ由来の天然Ｃ因子に対するアミノ酸配列が公知であるので、これらの配列に基づいて適宜調製することができる。その方法は特に限定されるものではないが、例えば次の方法で得ることができる。Ｃ末端にＨｉｓ−Ｔａｇを付加したＣ因子の目的塩基配列を合成し、トランスファーベクター（例えばｐＰＳＣ８、タカラバイオ社製）に導入し、得られた発現ベクター（Ｆａｃｔｏｒ Ｃ/ｐＰＳＣ８）ＤＮＡとバキュロウイルス（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡをＳｆ９細胞にコトランスフェクションし、培養上清から得られたウイルス液を純化、増幅することによって調製できる。また、Ｂ因子についても同様の方法で取得できる。Ｃ因子及びＢ因子共に、そのアミノ酸配列とこれをコードする遺伝子は既に知られており（Ｃ因子については市販されており、後述する実施例に当該市販品が開示されている。Ｂ因子について配列番号１５は遺伝子の塩基配列を示し、配列番号１６にアミノ酸配列を示した。）、これらの因子の組み換え体は当該配列情報に基づいて、上記の本発明酵素と実質的に同様の工程にて製造することができる。・・・
[0107]本発明方法１においては、カスケード反応タンパク質として、本発明酵素、組換えＣ因子及び組換えＢ因子のみを共存させることがより好ましい。
[0108]本明細書で用いる「カスケード反応」とは、次の反応の「１．」及び／又は「２．」のことをいう；
１．ライセートにＥｔが加わると、ライセート中に存在するＣ因子（Ｅｔ感受性因子、分子量１２３，０００）が活性化され、生成した活性型Ｃ因子がＢ因子（分子量６４，０００）の特定箇所を限定水解して活性型Ｂ因子を生成し、活性型Ｂ因子はＰｒｏ−ＣＥ（分子量５４，０００）を活性化してＣＥに変換し、ＣＥはコアギュロゲン（凝固タンパク、分子量１９，７２３）のジスルフィド結合で架橋されたループ内の特定箇所を、すなわち…Ａｒｇ１８−Ｔｈｒ１９…の間及び…Ａｒｇ４６−Ｇｌｙ４７…の間を限定水解してＨ−Ｔｈｒ１９…Ａｒｇ４６−ＯＨで表されるペプチドＣ（アミノ酸２８残基）を遊離しつつ残余の部分がコアギュリンゲルに変換される、という一連の反応、
２．ライセートにＢＧが加わると、ライセート中に存在するＧ因子（ＢＧ感受性因子）が活性化され、活性型Ｇ因子がＰｒｏ−ＣＥを活性化しＣＥに変換し、コアギュロゲンのジスルフィド結合で架橋されたループ内の特定箇所を限定水解し、コアギュリンゲルが生成される、という一連の反応。
[0109]また「カスケード反応タンパク質」とは「カスケード反応」を構成するタンパク質のことをいう。セリンプロテアーゼ前駆体（Ｃ因子、Ｂ因子、Ｇ因子及びＰｒｏ−ＣＥ）のことをいい、具体的には上記カスケード反応の「１．」ではＣ因子、Ｂ因子及びＰｒｏ−ＣＥのことをいい、「２．」ではＧ因子及びＰｒｏ−ＣＥのことをいう。」

（イ）甲１発明
「本発明酵素」とは、（甲１イ）に記載のとおり「本発明生産方法により製造されるＰｒｏ−ＣＥ（以下、「本発明酵素」という。）」のことで、「本発明生産方法」とは（甲１ウ）に記載されている方法であることから、具体的には「ウイルスを昆虫に由来するＳｆ９細胞に感染させ、当該細胞に保持させることで生産されるカブトガニ由来のＰｒｏ−ＣＥ」のことであり、そして、（甲１イ）から「組換え型のＰｒｏ−ＣＥ」といえる。
してみると、甲１には（特に下線部参照）、以下の発明が記載されていると認められる。

「Ｅｔの検出を行うためのカスケード反応タンパク質であって、
該カスケード反応タンパク質は、酵素、組換えＣ因子及び組換えＢ因子のみを共存させるもので、
組換えＣ因子は、カブトガニに由来するもので、Ｃ末端にＨｉｓ−Ｔａｇを付加したＣ因子の目的塩基配列を合成し、トランスファーベクターに導入し、得られた発現ベクターＤＮＡとバキュロウイルスＤＮＡをＳｆ９細胞にコトランスフェクションし、培養上清から得られたウイルス液を純化、増幅することによって調製されたものであり、
組換えＢ因子についても、カブトガニに由来するもので、上記組換えＣ因子と同様に調製されたものであり、
酵素は、ウイルスを昆虫に由来するＳｆ９細胞に感染させ、当該細胞に保持させることで生産されるカブトガニ由来の組換え型のＰｒｏ−ＣＥである、
カスケード反応タンパク質。」（以下「甲１発明」という。）

イ 甲２−１について
甲２−１には、以下の事項が記載されている。
（甲２ア）「【００１０】
発明の詳細な説明
本発明はエンドトキシンを検出するための試薬およびその試薬の使用方法である。試薬は、精製カブトガニC因子蛋白質および界面活性剤を含む。この試薬は、C因子に対する基質と共に使用することができ、この基質が開裂すると、検出可能なシグナルが発生し、試験試料中のエンドトキシンが検出される。界面活性剤が存在すると、エンドトキシンによる精製C因子の活性化が3〜7倍も増強され、試験試料中のエンドトキシンレベルのより迅速で高感度の測定が可能となる。試薬は好ましくは組換えC因子を含み、このためカブトガニ血リンパを連続供給する必要が無くなる。」

（甲２イ）「【００１７】組換えC因子を得る特に好ましい方法は、実施例2〜5において記述するように、バキュロウイルスシステム中で蛋白質を生産するものである。簡単に言うと、C因子コード配列をpFASTBAC1にクローニングする。得られた組換えプラスミドを、mini-attTn7標的部位を有するbacmidおよびヘルパープラスミドを含むDH10BACコンピテント細胞へ形質転換する。ヘルパープラスミドにより提供される転移蛋白質の存在下では、pFASTBACプラスミド上のmini-attTn7転移因子がbacmid上のmini-attTn7標的部位に転移することができる。lacZac遺伝子の分裂により組換えbacmidを含むコロニーを同定する。組換えbacmidを含む選択したDH10BACクローンから高分子量DNAを調製する。その後、このDNAを使用してS9昆虫細胞にトランスフェクトすると、細胞は組換えC因子を分泌する。本発明の特に驚くべき発見は、培養細胞から分離した分泌C因子を含む培地を、さらに精製せずに、界面活性剤(下記)と共にエンドトキシンアッセイ法における試薬として使用することができるということである。」

ウ 甲２−２について
甲２−２には、以下の事項が記載されている。


エ 甲３について
甲３には、以下の事項が記載されている。
（甲３ア）「Abstract
「Limulus Factor C is a potent antagonist of endotoxin from Gram-negative bacteria. A fusion construct containing full length Factor C has been cloned into Spodoptera frugiperda Sf9 cell. Stable Sf9 cell transfectants were obtained using Zeocin selection for 2 weeks. The recombinant Factor C (rFC) was secreted into the culture medium at 9 mg/L. Both the crude and partially purified rFC were able to detect lipid A at 10 pg/ml in an ELISA-based lipid A binding assay.」
（申立人訳参照：概要
リムルスファクターCは、グラム陰性細菌由来のエンドトキシンの強力なアンタゴニストである。完全長の因子Cを含む融合構築物をSpodoptera frugiperda Sf9細胞にクローニングした。Sf9細胞安定発現株は、2週間Zeocin選択を用いて得た。 組換えファクターC（rFC）は9mg/Lで培地に分泌された。粗製及び部分精製rFCの両方は、ELISAに基づく脂質A結合アッセイにおいて10μg/mLで脂質Aを検出することができた。）

オ 甲４について
甲４には、以下の事項が記載されている。
「The baculovirus expression system has become established as a popular method for obtaining high levels of recombinant protein synthesis in a eukaryotic environment (5). In a number of cases, however, researchers have reported decreased product quality and yield resulting from proteolytic activity late in the course of infection (2,3,8,12).
The enzyme most likely to cause this degradation is V-CATH, a cysteine protease encoded by Autographa californica M nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) (9), the parent virus of the most common baculovirus expression vectors.」（１８頁左欄５〜２０行）
（申立人訳参照：バキュロウイルス発現システムは、真核生物環境で組換えタンパク質合成を高レベルで行うための一般的な方法として確立されている（5）。しかしながら、多くのケースにおいて、研究者は、感染後期におけるタンパク質分解活性に起因する製品品質と収量の低下を報告している（2、3、8、12）。
この分解を引き起こす可能性が最も高い酵素は、Ｖ−ＣＡＴＨであり、当該酵素は、最も一般的なバキュロウイルス発現ベクターの親ウイルスであるAutographa californica M核多角体ウイルス（AcMNPV）（9）によってコードされるシステインプロテアーゼである。）

カ 甲５について
甲５には、以下の事項が記載されている。
「Several cell- or baculovirus proteases are involved in degradation events during protein production by insect cells.」（１頁左欄１９〜２１行）
（申立人訳参照：いくつかの細胞またはバキュロウイルスのプロテアーゼは、昆虫細胞によるタンパク質生産中の分解イベントに関与している。）

キ 甲６について
甲６には、以下の事項が記載されている。
（甲６ア）「In general, baculovirus vector-mediated protein expression in insect cells is superior to other systems in terms of capacity to produce higher levels of soluble recombinant proteins with correct folding and extensive posttranslational modifications. Furthermore, insect cell-based expression systems are appropriate for therapeutic protein production because insect cells can be grown in media free of protein or potential pathogens. However, the baculovirus expression system exhibits certain inherent limitations that are dictated by its very nature; the production of proteins is transient because host cells are lysed and killed during each infection cycle. Furthermore, the cell breakdown associated with late stages of baculovirus infection may prevent efficient secretion as well as completion of the extensive posttranslational modifications at the stage of maximal production of the expressed proteins.」（１１５頁下から５行〜１１６頁９行）
（申立人訳参照：一般に、昆虫細胞でのバキュロウイルスベクターを介したタンパク質発現は、正しいフォールディングと広範な翻訳後修飾により、高レベルの可溶性組換えタンパク質を生産する能力の点で他のシステムより優れている。さらに、昆虫細胞ベースの発現系は、治療用タンパク質の生産に適している。昆虫細胞は、タンパク質や潜在的な病原体を含まない培地で増殖できるためである。しかしながら、バキュロウイルス発現系は、それ自身の本来の性質によって決定されるある固有の制限を示す。宿主細胞は、各感染サイクル中に溶解して死滅するため、タンパク質の産生は一過性である。さらに、バキュロウイルス感染の後期に関連する細胞破壊は、発現されたタンパク質の最大産生の段階における、効率的な分泌及び広範な翻訳後修飾の完了を妨げる可能性がある。）」

（甲６イ）「Stably transformed insect cell lines represent the most attractive alternative to the baculovirus expression system and are especially suited for the production of secreted and membrane-anchored proteins.」（１１６頁１０〜１３行）
（申立人訳参照：安定形質転換昆虫細胞株は、バキュロウイルス発現系に代わる最も魅力的な代替品であり、分泌型及び膜固定型タンパク質の産生に特に適している。）」

ク 甲７について
甲７には、以下の事項が記載されている。
（甲７ア）「昆虫細胞−バキュロウイルス系はウイルスの感染により細胞が死滅してしまうため，目的タンパク質を連続的に生産することができない．これに対し，外来遺伝子を直接昆虫細胞に導入して安定形質転換細胞を作製し，目的タンパク質を連続的に生産する安定発現系が開発されている．」（６７３頁左欄２５〜３０行）

（甲７イ）「昆虫細胞を用いた安定発現系は，細胞がバキュロウイルスの感染による障害を受けないため正確な翻訳後修飾が行われるなどの利点を有するものの，バキュロウイルス系と比べて一般に発現レベルが低いとされる．」（６７３頁右欄４〜７行）

（３）当審の判断
ア 本件発明１について
（ア）対比
ａ本件発明１と甲１発明とを対比する。
本件発明１は「該タンパク質（１）〜（３）の各々は昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり」と記載されていることから、
タンパク質（１）であるファクターＣは、「昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり、前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される、下記のタンパク質（Ａ）または（Ｂ）であって、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ。
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質。」であり、
タンパク質（２）であるファクターＢは、「昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり、前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される、カブトガニのファクターＢ」であり、
タンパク質（３）であるエンザイムは、「昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり、前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される、カブトガニのプロクロッティングエンザイム」である。

（ａ）ファクターＣについて
甲１発明の「Ｃ末端にＨｉｓ−Ｔａｇを付加したＣ因子の目的塩基配列を合成し、トランスファーベクターに導入し、得られた発現ベクターＤＮＡとバキュロウイルスＤＮＡをＳｆ９細胞にコトランスフェクションし、培養上清から得られたウイルス液を純化、増幅することによって調製された」「カブトガニに由来する」「組換えＣ因子」と、上記本件発明１の「ファクターＣ」とは、「昆虫細胞をホストとして得られる組換えタンパク質であり、前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞であり、ファクターＣの活性を有するタンパク質である、ファクターＣ」の点で共通する。

（ｂ）ファクターＢについて
甲１発明の「上記組換えＣ因子と同様に調製された」「カブトガニに由来する」「組換えＢ因子」と、上記本件発明１の「ファクターＢ」とは、「昆虫細胞をホストとして得られる組換えタンパク質であり、前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞である、ファクターＢ」の点で共通する。

（ｃ）エンザイムについて
甲１発明の「ウイルスを昆虫に由来するＳｆ９細胞に感染させ、当該細胞に保持させることで生産されるカブトガニ由来の組換え型のＰｒｏ−ＣＥである」「酵素」と、上記本件発明１の「エンザイム」とは、「昆虫細胞をホストとして得られる組換えタンパク質であり、前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞である、カブトガニのプロクロッティングエンザイム」の点で共通する。

（ｄ）エンドトキシン測定剤について
甲１発明の「酵素、組換えＣ因子及び組換えＢ因子のみを共存させる」「Ｅｔの検出を行うためのカスケード反応タンパク質」は、上記（ａ）〜（ｃ）で述べた共通点の上で、本件発明１の「下記のタンパク質（１）〜（３）を含むエンドトキシン測定剤」に相当する。

ｂ 一致点・相違点
そうすると、本件発明１と甲１発明とは、
（一致点）
「下記のタンパク質（１）〜（３）を含むエンドトキシン測定剤であって、該タンパク質（１）〜（３）の各々は昆虫細胞をホストとして得られる組換えタンパク質であり、
前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される、測定剤。
（１）ファクターＣの活性を有するタンパク質である、ファクターＣ。
（２）カブトガニのファクターＢ。
（３）カブトガニのプロクロッティングエンザイム。」
の点で一致し、以下の点で相違する。

（相違点１）
ファクターＣが、本件発明１では、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」（以下「相違点１−１」という。）により得られる組換えタンパク質であり、「（１）下記のタンパク質（Ａ）または（Ｂ）」「（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含」むもの（以下「相違点１−２」という。）であって、「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」（以下「相違点１−３」という。）タンパク質であるのに対し、甲１発明では、「Ｃ末端にＨｉｓ−Ｔａｇを付加したＣ因子の目的塩基配列を合成し、トランスファーベクターに導入し、得られた発現ベクターＤＮＡとバキュロウイルスＤＮＡをＳｆ９細胞にコトランスフェクションし、培養上清から得られたウイルス液を純化、増幅することによって調製された」タンパク質である点。

（相違点２）
ファクターＢが、本件発明１では、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質であるのに対し、甲１発明では、「上記組換えＣ因子と同様に調製された」すなわち「Ｃ末端にＨｉｓ−Ｔａｇを付加したＢ因子の目的塩基配列を合成し、トランスファーベクターに導入し、得られた発現ベクターＤＮＡとバキュロウイルスＤＮＡをＳｆ９細胞にコトランスフェクションし、培養上清から得られたウイルス液を純化、増幅することによって調製された」タンパク質である点。

（相違点３）
エンザイムが、本件発明１では、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質であるのに対し、甲１発明では、「ウイルスを昆虫に由来するＳｆ９細胞に感染させ、当該細胞に保持させることで生産され」たタンパク質である点。

（イ）判断
ａ 相違点１について
相違点１−１及び１−３について検討する。
（ａ）甲２について
甲２−１の（甲２イ）に「C因子コード配列をpFASTBAC1にクローニングする」という記載があり、申立人の主張によれば、「pFASBAC1」はＨｉｓタグ配列が含まれていない（甲２−２参照）ということであるから、甲２−１には、Ｈｉｓタグ配列が含まれていないＣ因子配列コードで組換えＣ因子を得ることが記載されているとしても、それは「バキュロウイルスシステム中で蛋白質を生産するもの」であり、「安定発現細胞株で発現する」ことにより組換えタンパク質を得るものではない。
そもそも、甲２−１に記載の技術は、（甲２ア）に記載されているとおり、界面活性剤が存在すると、エンドトキシンによる精製C因子の活性化が3〜7倍も増強され、試験試料中のエンドトキシンレベルのより迅速で高感度の測定が可能となることから、精製カブトガニC因子蛋白質を含む試薬に「界面活性剤」を添加させるという技術であるから、甲２−１に接した当業者において、甲１発明に、エンドトキシンレベルのより迅速で高感度の測定が可能となるように「界面活性剤」を添加することは容易に想到することであるといえる。
しかし、甲１発明は、組換えＣ因子として「Ｃ末端にＨｉｓ−Ｔａｇを付加した」ものを用いるものであるから、「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」ものを用いることに動機があるとはいえず、甲２−１には、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質で「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質は記載されていないのであるから、甲２−１に接した当業者といえども、甲１発明の組換えＣ因子を、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質で「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質とすることが容易になし得たこととはいえない。

（ｂ）甲３について
甲３には、Sf9細胞をホストとし、細胞安定発現株として発現させた組換えファクターCが記載されているが、それが「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質であることについては記載されていない。
したがって、甲１発明の組換えＣ因子を、甲３を参照しても、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質で「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質とすることにはならない。
さらに、甲１発明においては、組換えＣ因子として「Ｃ末端にＨｉｓ−Ｔａｇを付加したＣ因子の目的塩基配列を合成し、トランスファーベクターに導入し、得られた発現ベクターＤＮＡとバキュロウイルスＤＮＡをＳｆ９細胞にコトランスフェクションし、培養上清から得られたウイルス液を純化、増幅することによって調製された」タンパク質、すなわち、いわゆるウイルス法により得られたタンパク質を用いており、甲１発明が、技術分野の[0001]に「ウイルス」と記載されていることからも、ウイルス法を前提とした発明ともいえることから、甲１発明において、ウイルス法により得られたタンパク質に替えて「安定発現細胞株で発現」させたタンパク質を用いる動機もない。
よって、甲３を参照しても、甲１発明の組換えＣ因子を、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質で「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質とすることが容易になし得たこととはいえない。

（ｃ）甲６及び甲７について
甲６及び甲７には、昆虫細胞をホストとして、「バキュロウイルスを感染させて発現させる（いわゆる「ウイルス法」）場合と「安定発現細胞株で発現」させる（いわゆる「安定発現細胞株法」）場合における、それぞれのメリット、デメリットについて記載されており、それらによると、ウイルス法では、ウイルスの感染により細胞が死滅してしまうことから生産は一過性のものであるが、高レベルの可溶性組換えタンパク質を生産する能力の点で優れており、安定発現細胞株法に比べて発現レベルが高いことが記載されている。また、安定発現細胞株法は、分泌型及び膜固定型タンパク質の産生に適していることも記載されている。
そうすると、甲１発明において、「組換えＣ因子」は「Ｅｔの検出を行うためのカスケード反応タンパク質」であるから、その検出を高感度に行うために、発現レベルが低いより高い方が好ましいといえることから、「バキュロウイルスＤＮＡをＳｆ９細胞にコトランスフェクションし、培養上清から得られたウイルス液を純化、増幅することによって調製」することに替えて「安定発現細胞株で発現する」こととする積極的な動機があるとはいえない。
また、甲６及び甲７には、「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質とすることについては記載されていない。
よって、甲６及び７を参照しても、甲１発明の組換えＣ因子を、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質で「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質とすることが容易になし得たこととはいえない。

（ｄ）甲４及び５について
甲４及び甲５の記載は、上記（２）オ及びカで摘記したとおりであり、甲４及び５を参照しても、甲１発明の組換えＣ因子を、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質で「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質とすることが容易になし得たこととはいえない。

（ｅ）効果について
仮に、甲１発明の組換えＣ因子を、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質で「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質とすることが容易であるとしても、それによる上記第４の２（３）の図４及び【０１０５】に記載されている「以上の結果から、Ｈｉｓタグ配列を付加しない形で発現させた組換えファクターＣ分子は、Ｈｉｓタグ配列を付加した形で発現させた組換えファクターＣ分子よりも、はるかに強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有することが示された。」という効果、さらには、【０１０７】〜【０１１７】に記載されている「安定発現細胞株法を採用すると、ファクターＣの分解を阻止できる」、「ウイルス法を用いる場合には中空糸ろ過膜によるろ過が必須である反面、安定発現細胞株法によれば、かかるろ過が不要である」、「安定発現細胞法で発現させた各因子を用いた場合、０．０００５〜０．１ＥＵ／ｍＬの範囲内で、エンドトキシン濃度の増加に応じて吸光度変化率が直線的に増加する」という効果は、当業者において予期し得るものではない。

（ｅ）小括
よって、甲２〜７を参照しても、甲１発明の組換えＣ因子を、昆虫細胞をホストとした「安定発現細胞株で発現すること」により得られる組換えタンパク質で「Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さない」タンパク質とすることが容易になし得たこととはいえないことから、相違点１−２について検討するまでもなく、相違点１は当業者が容易になし得たこととはいえない。

ｂ まとめ
したがって、相違点２及び３について検討するまでもなく、本件発明１は、甲１発明及び甲２〜７の記載事項に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものではない。

イ 本件発明２〜７について
本件発明２〜７は、本件発明１を直接的又は間接的に引用するものであるから、本件発明１と同様に、甲１発明及び甲２〜７の記載事項に基づいて、当業者が容易に発明することができたものではない。

ウ 申立理由１のまとめ
本件発明１〜７は、甲１発明及び甲２〜７の記載事項に基づいて、当業者が容易に発明をすることができたものではないから、請求項１〜７に係る特許は、特許法第29条第2項の規定に違反してされたものではなく、申立理由１によって取り消すことはできない。

２ 申立理由２（実施可能要件）
（１）申立人は、特許異議申立書で、上記第４で記載した取消理由（サポート要件）と同時に、本件特許は、その発明の詳細な説明の記載が、特許法第36条第4項第1号に規定にする要件を満たしていない特許出願に対してされたものであるから、請求項１、２及び４〜７に係る特許は、特許法第113条第4号に該当し、取り消されるべきものであると主張している。
具体的には、甲８〜１０を提示した上で、「Ｈｉｇｈ Ｆｉｖｅ細胞のように、Ｓｆ９細胞とは翻訳後修飾機構が異なる昆虫細胞を宿主とした場合には、Ｓｆ９昆虫細胞を用いた本件明細書の実施例４の組換えファクターＣとは、糖鎖構造等が異なる組換えファクターＣが産生され、かつこれらの組換えファクターＣが、本件明細書の実施例４の組換えファクターＣと同様にエンドトキシン測定感度の向上を示すかどうかは、本件明細書の記載から、当業者は理解できない。
したがって、本件明細書に本件発明の効果が具体的に開示されているのは、Ｓｆ９昆虫細胞により発現させた組換えファクターＣ等のみであり、よって、その他の昆虫細胞により発現させた組換えファクターＣ等をも含む本件発明１、２、４〜７は、サポート要件（特許法第36条第6項第1号）及び実施可能要件（同条第４項第１号）を充足していない。」ことを主張している。
甲第８号証：川口裕子等、「3.遺伝子導入と発現シリーズ昆虫細胞を利用した蛋白質の大量発現と解析：キサンチン酸化還元酵素を例に（3）」、日医大医会誌、2012年、第8巻、第1号、第26〜30頁
甲第９号証：Morais et al.,“Expression and characterization of recombinant human a-3/4-fucosyltransferase III from Spodoptera frugiperda (Sf9）and Trichoplusia ni (Tn) cells using the baculovirus expression system”.Biochemical Journal,2001,vol.353,p.719-725
甲第１０号証：Hancock et al.,“False positive reactivity of recombinant,diagnostic, glycoproteins produced in High FiveTM insect cells: Effect of glycosylatiori”，Journal of Immunological Methods,2008,vol.330,p.130-136
（以下「甲８」〜「甲１０」という。）

（２）当審の判断
申立人は、サポート要件（特許法第36条第6項第1号）と実施可能要件（同条第４項第１号）を充足していない理由として同じことを主張していることから、上記第４で述べたとおり、本件発明１、２及び４〜７が、サポート要件を満たしているということは、実施可能要件も満たしていることになる。
また、上記甲８〜１０は、組換え夕ンパク質の発現に使用される宿主となる昆虫細胞には様々な種類のものが販売されており、発現したい蛋白質の性質によっていずれの細胞種が適しているかは異なること、細胞種によって糖鎖構造等の翻訳後修飾が異なる例、等が示されているにすぎず、「Ｓｆ９細胞以外の昆虫細胞」では、それをホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質でＣ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣが、強いプロクロッティングエンザイム活性化能を有せず、迅速且つ高感度にエンドトキシンを測定することができないことを示すものではないことから、甲８〜１０の記載に本件発明１、２及び４〜７を実施することができなとする根拠を見いだすことはできない。
よって、発明の詳細な説明の記載が、特許法第36条第4項第1号に規定にする要件を満たしていない特許出願に対してされたものとはいえず、請求項１、２及び４〜７に係る特許を申立理由２によって取り消すことはできない。

第６ むすび
以上のとおりであるから、請求項１〜７に係る特許は、取消理由通知（決定の予告）に記載した取消理由及び特許異議申立書に記載された特許異議申立理由によっては、取り消すことができない。
また、他に請求項１〜７に係る特許を取り消すべき理由を発見しない。
よって、結論のとおり決定する。
 
発明の名称 （５７）【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記のタンパク質（１）〜（３）を含むエンドトキシン測定剤であって、該タンパク質（１）〜（３）の各々は昆虫細胞をホストとした安定発現細胞株で発現することにより得られる組換えタンパク質であり、
前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞、Ｓｆ２１細胞、ＳＦ＋細胞、及びＨｉｇｈ−Ｆｉｖｅ細胞からなる群より選択される、測定剤。
（１）下記のタンパク質（Ａ）または（Ｂ）であって、Ｃ末端にＨｉｓタグ配列を有さないファクターＣ。
（Ａ）配列番号２に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｂ）配列番号２に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＣの活性を有するタンパク質。
（２）カブトガニのファクターＢ。
（３）カブトガニのプロクロッティングエンザイム。
【請求項２】
前記ファクターＢが下記のタンパク質（Ｃ）または（Ｄ）であり、且つ、前記プロクロッティングエンザイムが下記のタンパク質（Ｅ）または（Ｆ）である、請求項１に記載の測定剤。
（Ｃ）配列番号４に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｄ）配列番号４に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、ファクターＢの活性を有するタンパク質。
（Ｅ）配列番号６に示すアミノ酸配列を含むタンパク質。
（Ｆ）配列番号６に示すアミノ酸配列に対して９０％以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、かつ、プロクロッティングエンザイムの活性を有するタンパク質。
【請求項３】
前記昆虫細胞が、Ｓｆ９細胞である、請求項１または２に記載の測定剤。
【請求項４】
前記ファクターＣのＣ末端は、ペプチドが付加されていない、請求項１〜３のいずれか１項に記載の測定剤。
【請求項５】
請求項１〜４のいずれか１項に記載の測定剤と被験試料とを混合する工程、およびカスケード反応の進行を測定する工程を含む、被験試料中のエンドトキシン測定法。
【請求項６】
カスケード反応の進行を検出するための基質を反応系に添加する工程を含む、請求項５に記載の測定法。
【請求項７】
さらに、前記基質の反応に基づき、被験試料中のエンドトキシン量を算出する工程であって、エンドトキシン量と基質の反応の程度との間の相関データに基づき、前記被験試料に存在するエンドトキシンを定量する工程を含む、請求項６に記載の測定法。
 
訂正の要旨 審決（決定）の【理由】欄参照。
異議決定日 2021-10-18 
出願番号 P2018-074569
審決分類 P 1 651・ 536- YAA (G01N)
P 1 651・ 121- YAA (G01N)
P 1 651・ 537- YAA (G01N)
最終処分 07   維持
特許庁審判長 福島 浩司
特許庁審判官 伊藤 幸仙
三崎 仁
登録日 2020-01-07 
登録番号 6640267
権利者 生化学工業株式会社
発明の名称 エンドトキシン測定剤  
代理人 堺 繁嗣  
代理人 佐貫 伸一  
代理人 佐貫 伸一  
代理人 堺 繁嗣  
代理人 丹羽 武司  
代理人 丹羽 武司  

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